體視熒光顯微鏡的使用方法：

(1)將材料片放在載物臺上。

(2)開啟體視熒光顯微鏡穩(wěn)壓器，然后按下啟動組點燃紫外燈15min內不得關閉，關閉后3min內不得再啟動。

(3)將激發(fā)濾光片轉至v，分色片調到v，選用495或475nm阻擋濾光片。

(4)選用uvFL40、uvFL100熒光接物鏡鏡檢。

(5)在玻片上加無熒光油，先用40 x，再用100 x調焦鏡檢.呈現(xiàn)熒光。

(6)因熒光物質受紫外光照射時隨時間的增長熒光逐漸變弱，因此鏡檢時應經常變換視野。

(7)也可用uvFL10或uvFL20低倍鏡鏡檢材料(用低倍鏡時不加無熒光油)。

熒光圖像的記錄方法：

體視熒光顯微鏡所看到的熒光圖像，一是具有形態(tài)學特征，二是具有熒光的顏色和亮度，在判斷結果時，要將二者結合起來綜合判斷。結果記錄根據(jù)主觀指標，即憑工作者目力觀察。作為一般定性觀察，基本上可靠的。隨著技術科學的發(fā)展，在不同程度上采用客觀指標記錄判斷結果，如用細胞分光光度計，圖像分析儀等儀器。但這些儀器記錄的結果，也要結合主觀的判斷。

體視熒光顯微鏡攝影技術對于記錄熒光圖像十分必要，由于熒光很易褪色減弱，要即時攝影記錄結果。方法與普通顯微攝影技術基本相同。只是需要采用高速感光膠片如ASA200以上或24。以上。因紫外光對熒光猝滅作用大，如FITC的標記物，在紫外光下照射30s，熒光亮度降低50%。所以，曝光速度太慢，就不能將熒光圖像拍攝下來。一般研究型體視熒光顯微鏡都有半自動或全自動顯微攝影系統(tǒng)裝置。

注意事項：

(1)嚴格按照體視熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程序。

(2)應在暗室中進行檢查。進入暗室后，接上電源，點燃超高壓汞燈5～15min，待光源發(fā)出強光穩(wěn)定后，眼睛完全適應暗室，再開始觀察標本。

(3)防止紫外線對眼睛的損害，在調整光源時應戴上防護眼鏡。

(4)檢查時間每次以1～2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，熒光減弱;標本受紫外線照射3～5min后，熒光也明顯減弱;所以，不得超過2～3h。

(5)體視熒光顯微鏡光源壽命有限，標本應集中檢查，以節(jié)省時間，保護光源。天熱時，應加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時，須待燈泡充分冷卻后才能點燃。應避免每天數(shù)次點燃光源。

(6)標本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發(fā)。

(7)熒光亮度的判斷標準：一般分為四級，即“一”—無或可見微弱熒光?！?”—僅能見明確可見的熒光?！?+”—可見有明亮